一文解读PBMC成团
冻存后的pbmc复苏后进行培养时有时会形成聚集的细胞团块无法吹散？
小到显微镜下可以观察到细胞聚团，大到肉眼即可观察到较明显的絮状或块状团块？
部分细胞原本就有聚团生长的特性，随着接种密度增大，显微镜下观察到少量细胞细胞聚集属于正常情况，但如果形成肉眼可见的团块且使用移液器吹打也无法吹开时，就应引起注意了。
PBMC复苏后聚团的主要原因有以下几点：
1、是在细胞冻存复苏的过程中外界压力加速细胞死亡，从死细胞中释放出来的“粘性”DNA 分子将邻近的细胞粘合在一起，因此产生了细胞团块。
2、通常冻存的PBMC中还会混合有数量不等的血小板，当血小板过多时，血小板的凝集也可能会导致细胞聚团严重。
3、若PBMC接种密度过大，造成培养皿中细胞密度过大，也有可能导致细胞更易聚团。
针对以上几种原因，我们推荐用下面几种方法操作，缓解PBMC复苏培养后成团的情况。
通过实验操作，我们发现，当PBMC以不同密度接种在1640完全培养基中时，观察细胞，大约1小时后部分高密度细胞开始有聚集现象发生，两小时后聚集明显，当细胞接种密度在3million/mL以下，通过移液器吹打可以将絮状沉淀完全吹开，当细胞密度低于1million/mL时，肉眼几乎无法观察到细胞成团。所以建议在PBMC复苏后培养的过程中，细胞密度维持在1-2million/mL。
另外，在样本中加入脱氧核糖核酸内切酶 I（DNase I）可以减少 DNA 悬浮碎片和细胞团块。现今有许多使用 DNase I 以减少细胞团块的有效操作方法。我们推荐在细胞悬液中加入 DNase I 溶液至终浓度为 0.1 mg/mL（或者 200 Kunitz units/mL），并在室温孵育 15 分钟之后进行下游应用（但如果您的样本样品用于提基因组则需要慎重处理）。
EDTA是一种非酶性消化物，常用不含Ca2+和Mg2+的PBS 配成工作液。. 关于EDTA的作用机制一般认为是：一些组织在生存中需要Ca2+和Mg2+才能维持组织的完整性。EDTA能从这些组织生存环境中吸收这些离子，形成螯合物，能促进细胞相互分离。所以通常1 mM EDTA 也可以有效防止细胞成团。
另外，复苏细胞后使用37 μm 细胞网筛进行过滤后再进行接种，也有助于缓解细胞成团现象 。
极少数志愿者会出现细胞大规模成团，沉淀无法吹开的情况，如果 DNase I 无法消化成功，可能是由于细胞表面黏连蛋白的作用，推荐尝试胰蛋白酶消化。
上一个：
下一个：
联系我们
留言板
邮箱：
余女士：
导航下拉添加类名.active
在线客服添加返回顶部
右侧在线客服样式 1,2,3 1
图片alt标题设置： 无锡合佑生生物科技有限公司
表单验证提示文本： 内容不能为空！
循环体没有内容时： 抱歉，找不到匹配的项目。
CSS / JS 文件放置地