使用Tips（二）|γδT扩增试剂盒（细胞因子法）扩增Tips
背景简介
γδT细胞因不依赖MHC识别、无细胞子风暴和脱靶效应，广谱抗肿瘤、无需基因修饰等特性和其通用型且成本低的扩增技术有望成为下一个通用型热门治疗管线。Hycells依托于原有的免疫细胞技术平台，开发出γδT细胞扩增培养基，纯因子配方，定向扩增Vδ2细胞，扩增纯度高，杀伤活性好且体内有持续扩增能力，及时填补了市场这一不断增长的需求。
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编号 |
名称 |
规格 |
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GD990-1L |
HiXpan™ γδT Cell Expansion Medium Kit |
1 kit |
γδT扩增试剂盒（细胞因子法）的产品优势：
1、纯因子配方；
2、以新鲜/冻存PBMC为起始细胞，定向扩增Vδ2细胞，扩增200-300倍，工艺可以线性放大；
3、扩增纯度超过90%，杀伤活性高，高表达CD56、NKG2D、HLA-DR；
4、体内有持续扩增能力。
经过近一年市场和客户的使用反馈，合佑生技术团队搜集并梳理了γδT扩增试剂盒使用过程中最聚焦、最关心的问题，让更多的合作伙伴们快速达到实验预期效果。
γδT扩增试剂盒（细胞因子法）扩增Tips
Q ：试剂盒是否可以分装使用？如何分装？
A ：可以分装，但由于批次间体积会有细微差异，建议分装前将各因子进行离心，使用移液器量取因子总体积后按比例分装。
eg:试剂盒推荐起始量15～20 mL外周血的样本量，本次用5 million细胞起始扩增，可以离心ABCDE因子，用移液器量取体积，按体积分别将因子ABCDE分装各1/4份，将1/4份因子A加入250ml基础培养基之后，取2.5ml加入10%自体血浆（血替/fbs）再分别按说明书推荐的时间加入1/4份B/C/D/E因子扩增。
Q ：因子A加入整瓶培养基之后能保存多久？
A：建议一个月内用完，由于因子稀释到较低浓度之后效价会降低。如果一次用不完建议将因子分装而不是一次配完之后使用。
Q：扩增前期能否吹打细胞？
A：扩增前7天不建议吹打细胞，按照比例补液即可，因为前期细胞聚团激活，如果吹打细胞，吹散团块可能会降低激活效果。前7天也不建议取样检测流式，DAY7之后建议按照细胞计数情况补液，检测流式情况。
Q：基础培养基加入因子A和E之后如果没有用完，是否可以再次取出加入B/C/D进行新一轮激活？
不可以，如果有分批次扩增的需求，可以分装因子或配完基础培养基+A之后取出10-20ml再加入因子E，取出的部分在一个月内可以加入B/C/D进行下一个批次激活。
Q ：培养基如何回温？
A ：配好的培养基可以取出本次需要用的量放置于37℃回温，但不建议整瓶放入37℃快速回温，反复高温回温可能会影响因子效价。若要整瓶回温建议提前1h拿到室温回温。
Q: 补液时机？
A: 第一次补液建议DAY3 or DAY4进行补液，具体补液时机需要根据细胞成团情况，镜下大约30%以上的细胞明显结团即可补液。
DAY3结团不够明显，可以再等一天进行补液。
结团明显，可进行补液。
注：若DAY4仍未看到明显的结团现象，不建议再等，可以直接补液，后续观察激活情况。
Q: 血浆/血替/培养基使用情况？
A: 血浆/血替/FBS均可使用，前期建议加10%，扩增中期可以加5%，后续加入剩余自体血浆or减少血替/FBS用量，不可以不加血浆/血替。
Q: 样本要求?
A: 新鲜样本扩增效果最佳，起始γδT比例不会影响最终扩增效果。但样本中VD2+比例大于2%扩增成功概率更高，大于5%最佳。若样本是冻存样本，冻存液对γδT扩增效果很重要，Hycells有优选的免疫细胞冻存液（货号：HYS01013），对NK/monocyte/GDT等脆弱细胞有较好的冻存效果。
Q: DAY7 γδT比例一般能到多少？
A: 扩增顺利的情况下大部分Donor Day7 能达到60%-70%纯度。
Q: 扩增最终纯度可以达到多少？
A: 扩增较好的Donor DAY14-DAY18能到90%以上纯度。
Q ：扩增倍数能达到多高？
A ：扩增效果较好的Donor DAY14 扩增后的γδT细胞/初始PBMC能达到100倍-300倍的扩增倍数。
Q：基础培养基选用？
A：建议使用Hycells基础培养基(货号：GD990-M)，其他市面上无血清培养基效果需要与Hycells技术确认。
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