使用Tips（一）|NK扩增试剂盒（细胞因子法）扩增Tips
背景简介
NK细胞体外扩增培养时会遇细胞扩增速率低，扩增时间较长以及在初始培养时发现常规T细胞过度生长从而导致NK细胞的表型衰竭等现象。合佑生NK扩增试剂盒（细胞因子法）支持不同来源的NK细胞在无滋养层下快速扩增培养，是细胞治疗临床实验和研究的优选，适用于人外周血，脐带血为起始样本的NK 细胞扩增培养。
| 编号 | 名称 | 规格 |
| NK882-1L | HiXpan™ NK Cell Expansion Kit(Cytokine) | 1 kit |
| NK882-1L | HiXpan™ NK Cell Expansion Kit(Cytokine) | 1 kit |
合佑生这款NK扩增试剂盒（细胞因子法）因其扩增能力强、扩增后的NK细胞纯度高，杀伤能力强深受广大用户的好评。感谢小伙伴们一路以来的支持和肯定，合佑生技术团队搜集并梳理了NK扩增试剂盒使用反馈最聚焦、最关心的问题，让更多的合作伙伴们快速达到实验预期效果。
NK扩增试剂盒（细胞因子法）扩增Tips
Q ：试剂盒是否可以分装使用？如何分装？
A ：可以分装，但由于批次间体积会有细微差异，建议分装前将各因子进行离心，使用移液器量取因子总体积后按比例分装。
eg:试剂盒推荐起始量30～60mL外周血或者脐血的样本量，本次用5million细胞起始扩增，可以离心ABCD因子，用移液器量取体积，按体积分别将因子ABCD分装各1/4份，将1/4份因子A加入250ml基础培养基之后，取2.5ml加入10%自体血浆（血替/fbs）再分别按说明书推荐的时间加入1/4份B/C/D因子扩增。
Q ：因子A加入整瓶培养基之后能保存多久？
A：建议一个月内用完，由于因子稀释到较低浓度之后效价会降低。如果一次用不完建议将因子分装而不是一次配完之后使用。
Q：扩增前期能否吹打细胞？
A：扩增前7天不建议吹打细胞，按照比例补液即可，因为前期细胞聚团激活，如果吹打细胞，吹散团块可能会降低激活效果。前7天也不建议取样检测流式，DAY7之后建议按照细胞计数情况补液，检测流式情况。
Q ：培养基如何回温？
A ：配好的培养基可以取出本次需要用的量放置于37度回温，但不建议整瓶放入37摄氏度快速回温，反复高温回温可能会影响因子效价。若要整瓶回温建议提前1h拿到室温回温。
Q ：补液时机？
A：第一次补液建议DAY3orDAY4进行补液，具体补液时机需要根据细胞成团情况，镜下大约30%以上的细胞明显结团即可补液。
DAY3结团不够明显，可以再等一天进行补液。
结团明显，可进行补液。
注：若DAY4仍未看到明显的结团现象，不建议再等，可以直接补液，后续观察激活情况。
Q ：血浆/血替/培养基使用情况？
A ：血浆/血替/FBS均可使用，前期建议加10%，扩增中期可以加5%，后续加入剩余自体血浆or减少血替/FBS用量，DAY9之后可以不加自体血浆（or血替）但加入扩增效果更佳。
Q ：样本要求
A：新鲜样本扩增效果最佳，起始NK比例会影响最终扩增效果。建议样本起始NK比例大于15%，T细胞比例小于60%能获得最佳扩增效果。若样本是冻存样本，冻存液对NK扩增效果很重要，HYCELLS有优选的免疫细胞冻存液，对NK/monocyte/GDT等脆弱细胞有较好的冻存效果。
Q: DAY7 NK比例一般能到多少？
A：NK细胞扩增跟Donor相关性很大，部分Donor Day7 能达到60%-70%纯度，部分Donor可能只有30%-40%。
Q：扩增最终纯度可以达到多少？
A： NK细胞扩增跟Donor相关性很大，扩增较好的Donor DAY14-DAY18能到90%以上纯度。
Q ：扩增倍数能达到多高？
A ：扩增效果较好的Donor DAY14 扩增后的NK细胞/初始PBMC能达到100倍的扩增倍数。
Q：基础培养基选用？
A：建议使用hycells无血清基础培养基，市面上其余无血清培养基如corning 581/TARAKA H3/X-VIVO也可达到较好效果。
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