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使用Tips（三）|NK扩增试剂盒（滋养层细胞法）扩增Tips

免疫治疗作为当下最有前景的癌症治疗方法，其中非特异性免疫细胞主要以NK细胞成为颇具潜力的细胞。NK细胞无需预先刺激就可起作用，反应速度更快；通常不介导发生GVHD，安全性更高。细胞来源丰富，外周血、脐血、人类胚胎干细胞、诱导多功能干细胞甚至NK-92细胞系，可做为现货型免疫细胞的首选之一。滋养细胞法能实现NK细胞的快速扩增，得到高纯度高质量的NK细胞，具有良好的稳定性，纯度高，扩增快等特点。

 

IL-15/IL-21 NK细胞扩增试剂（滋养层细胞法）是合佑生研发团队研制，用于人类自然杀伤细胞(NK) 扩增培养的试剂,可高效扩增人外周血和脐带血来源的NK细胞(NK细胞经培养可扩增300-400倍，以终末收获NK细胞比起始PBMC计算) , NK细胞纯度高( CD3- CD56+表达率可高于90%)。

 

编号 名称 规格
NK881-F HiXpan™ NK Cell Expansion Reagent(Feeder Cell，IL-15) 1mL
NK881-21-F HiXpan™ NK Cell Expansion Reagent(Feeder Cell，IL-21 1mL
NK881-2L  HiXpan™ NK Cell Expansion Kit(Feeder Cell，IL-15) 1 kit
NK881-21-2L  HiXpan™ NK Cell Expansion Kit(Feeder Cell，IL-21) 1 kit

 

NK扩增试剂盒（滋养层细胞法）的产品优势：

  • 自主化、国产化的原研体系;

  • 适用于多种来源NK细胞的培养;

  • 培养13天，NK细胞扩增达300-400倍;

  • 扩增的NK细胞纯度可高达90%。

     

经过合佑生团队和客户伙伴们对NK这款扩增试剂盒不断优化和验证总结，合佑生技术团队搜集和梳理了NK扩增试剂盒（滋养层细胞法）使用过程中，大家最聚焦和关心的问题。

 

NK扩增试剂盒（滋养层细胞法）扩增Tips

 

Q1、试剂盒是否可以分装使用？

A ：不建议分装，扩增试剂为辐照后的滋养层细胞，一支扩增试剂对应起始PBMC细胞量为8-10E7的PBMC，若要减少起始PBMC量，则按照相应比例减少扩增试剂用量。如起始2E7 PBMC，扩增试剂使用1/4，按照2E6/mL,10ml起始体积的扩增体系进行实验即可。

 

 

Q2、扩增前期能否吹打细胞？

A ：扩增前7天不建议吹打细胞，按照比例补液即可，因为前期细胞聚团激活，如果吹打细胞，吹散团块可能会降低激活效果。前7天也不建议取样检测流式，DAY7之后建议按照细胞计数情况补液，检测流式情况。

 

 

Q3、IL2添加浓度？

A：前7天按照100IU/mL（终体积）添加IL2,后7天按照1000IU/mL添加IL2，也可提前配好培养基，但配好的培养基不建议4℃保存太久（一个月内用完），避免因子效价降低。

 

Q4、补液时机？

 

A：第一次补液建议DAY3 or DAY4进行补液，具体补液时机需要根据细胞成团情况，镜下大约30%以上的细胞明显结团即可补液，若AY3镜下没有明显细胞团，可以DAY4进行第一次补液。

注：若DAY4仍未看到明显的结团现象，不建议再等，可以直接补液，后续观察激活情况。

 

图片1.png

DAY3结团不够明显，可以再等一天进行补液。  

图片2.png

结团明显，可进行补液。

 

 

Q5、血浆/血替/培养基使用情况？

A：血浆/血替/FBS均可使用，前期建议加10%，扩增中期可以加5%，后续加入剩余自体血浆or减少血替/FBS用量，DAY9之后可以不加自体血浆（or血替）但加入扩增效果更佳。

 

Q6、样本要求?

A：新鲜样本扩增效果最佳，起始NK比例会影响最终扩增效果。建议样本起始NK比例大于15%，T细胞比例小于60%能获得最佳扩增效果。若样本是冻存样本，冻存液对NK扩增效果很重要，Hycells有优选的免疫细胞冻存液（货号：HYS01013），对NK/Monocyte/γδT等脆弱细胞有较好的冻存效果。

 

Q7、DAY7 NK比例一般能到多少？

A：NK细胞扩增跟Donor相关性很大，部分Donor day7 能达到60%-70%纯度，部分Donor可能只有30%-40%。

 

Q8、扩增最终纯度可以达到多少？

A：NK细胞扩增跟Donor相关性很大，扩增较好的Donor DAY14-DAY18能到90%以上纯度。

 

Q9、扩增倍数能达到多高？

A：扩增效果较好的Donor DAY14 扩增后的NK细胞/初始PBMC能达到300-400倍扩增倍数。

 

Q10、基础培养基选用？

A：建议使用Hycells无血清基础培养基，市面上其余无血清培养基如Corning 581/TARAKA H3/X-VIVO也可达到较好效果。

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