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IFN-γ酶联斑点检测试剂盒（ELISPOT）
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所属分类
- 产品描述
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ELISPOT技术原理
酶联免疫斑点检测“酶联免疫”与ELISA中的含义相同，都是基于酶促反应放大效应的免疫学检测。与ELISA一样，ELISPOT的抗体也是吸附（包被）在固体基板上，所不同的是ELISA抗体捕获的目标来自样本溶液中已经存在的、均匀分布的蛋白，而ELISPOT抗体捕获的目标来自于样本细胞在动态刺激过程中新鲜分泌的蛋白；ELISA显色出来的是有色溶液，而ELISPOT显色出来的是沉积在固体基板上的有色斑点。ELISPOT和ELISA都是基于双抗夹心法的技术原理，但是ELISPOT在ELISA的基础上又加入了细胞培养技术。ELISA是对检测样本溶液中靶蛋白的浓度进行定量测定，而ELISPOT是对样本中活细胞免疫状态进行动态的检测评估。
ELISPOT（enyzme-linked immunospot，酶联免疫斑点法）可以定量测量单个细胞分泌的细胞因子的数量。作为目前最敏感的分子检测方法之一，ELISPOT表现出了比ELISA高达20至200倍的敏感度。因为被分析物分泌后立刻和捕获抗体结合，ELISPOT分析物不会受到结合蛋白和蛋白酶的破坏。包括高灵敏度，高可信度，高通量检测和不破坏免疫功能在内等优势使得这个方法成为研究小规模活细胞群的实用工具。在免疫学基础研究、疫苗研究和免疫原性等多个领域有着广泛的应用。特别是IFN-γ ELISPOT检测方法，已成为评估疫苗引起的细胞免疫效应的“金标准”。通过检测IFN-γ的水平，可以间接评估辅助性T细胞的活性，这对于研究免疫反应至关重要。
合佑生依托于丰富的自有细胞库和ELISPOT研发技术服务平台，推出IFN-γ酶联斑点检测试剂盒（货号：DCT01004-kit）。本产品采用预包被 ELISPOT 试剂盒，使实验检测时间从 3 天缩短至 2 天，大幅度减少无菌操作的实验步骤，减轻实验者的劳动强度和减少污染的机会。使得实验者能够轻松、高效地完成复杂的 ELISPOT检测实验。
IFN-γ酶联斑点检测试剂盒产品简介
试剂盒组成成分
产品优势
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试剂盒全链条本土化：原研抗体对源于内部筛选，包被工艺和包被试剂全部实现自研和国产化；
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样本适用性广：适用于体外定量检测人血清、血浆,细胞培养液或其它相关生物液体中γ干扰素含量；
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特异性强：采用双抗夹心法，适合复杂样本检测；
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灵敏度高：检测灵敏度均在个位数内；
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操作方便：样本不需要特殊的纯化处理；
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重复性好：多次重复实验，板内和板间变异系数小，具有很好的稳定性；
产品使用操作流程
Day 1：接种细胞，加入刺激物或者待测样本，培养操作（严格注意无菌操作）
1. 预包被板的活化处理：每孔加入 200μL 无血清培养基或者 RPMI-1640 培养基，室温静置 5-10 分钟后将其扣出。
2. 加入细胞悬液：将调整好浓度的细胞悬液加入各实验孔。
3. 加入刺激物：加入培养基1：1000稀释后的PHA。
4. 加入待测样本： 根据实验需求，加入培养基稀释后的待测样本。空白/阴性对照用相同体积培养基。
5. 孵育：所有样品和刺激物加完后，盖好板盖。放入 37℃， 5％CO2培养箱培养 16-20 小时。
Day 2：培养后检测操作
1. 裂解细胞：倾倒孔内细胞及培养基。加入200μL/well冰冷的去离子水，4℃放置5-10 分钟低渗裂解细胞。
2. 洗板：倾倒孔内液体，用1×PBS，200μL/well，洗涤 5次。最后一次，在吸水纸上扣干。
3. 检测抗体孵育：用含1.0% BSA PBS稀释Biotinylate antibody工作液，加入各实验孔，100μL/well。37℃ 孵育 1 小时。
4. 洗板：倾倒孔内液体，用1×PBS，200μL/well，洗涤 5 次。最后一次，在吸水纸上扣干。
5. 酶联亲和素孵育：将稀释好的Streptavidin-HRP工作液加入各实验孔，100μL/well。37℃孵育 1 小时。
6. 洗板：倾倒孔内液体，用1×PBS，200μL/well，洗涤 5 次。最后一次，在吸水纸上扣干。
7. 显色：将TMB 显色液工作液加入各实验孔，100μL/well。室温避光静置 5-15 分钟。
8. 终止显色：倾倒孔内液体，揭开板底座，用去离子水洗涤，正反面及底座 3-5 遍，终止显色。将板放置在室温阴凉处，待其自然晾干后合上底座。
9. ELISPOT 板斑点计数，并记录斑点的各种参数，做统计分析。
IFN-γ酶联斑点检测试剂盒验证数据展示
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Hycells读取的酶联免疫斑点数比进口竞品更加显著，产品测试精准度更精良。
重现性： PBMC + PHA （1.0 μg/mL）, 孵育16h后检测，11个重复。
进口竞品 CV值
Hycells CV值
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表格中的数据明显看出，Hycells的CV值明显小于国外竞品，产品性能相对更加稳定。
竞品ELISPOT
试剂盒读板图
Hycells ELISPOT
试剂盒读板图
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图片明显观察出，Hycells的IFN-γ酶联斑点检测试剂盒非特异性结合弱，背景更干净。
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