Hycells新品｜挑战“现货型”NK&γδT细胞冻存难题
发布时间：
2024-04-12 14:01
产品背景简介
细胞冻存液作为冻存细胞时的液体环境,给细胞提供着营养和保护作用,可使冰点降低,提高细胞膜对水的通透性,能使细胞内水分在冻结前透出细胞,防止或减少冰晶对细胞的损伤,使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,在需要时直接复苏就可恢复细胞活性。传统的细胞冻存液是使用培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合,因其中的血清成分复杂、批次差异大等缺点,其应用具有局限性,且需要采用程序性降温的冻存方法,费时费力。
合佑生新推出的无血清细胞冻存液主要适用于NK细胞和γδT细胞、T细胞、树突状细胞（DCs）、外周血单个核细胞（PBMCs）、胚胎干（ES）和诱导多能干（iPS）细胞、间充质干细胞（MSCs）等细胞，经验证，性能优于同类进口产品。
1、无血清且无动物源成分。
2、2-8℃保存，无需反复冻融。
【产品原理】
细胞冻存液含多种保护剂成分,一些保护剂易于穿透细胞,避免细胞内部水分子形成冰晶损伤细胞, 同时另一些保护剂不能穿透细胞,但可以在冰晶形成之前,优先结合细胞外的水分子,降低细胞外溶液的电解质浓度,减少阳离子进入细胞的数量。我公司无血清细胞冻存液为多种保护剂组合,在细胞内外进行双重保护,大大提高了细胞复苏存活率。细胞冻存液成分明确，更安全有效。
【产品优势】
安全：无血清，无异源体成分；
精准定位：适用于免疫细胞及干细胞的存储，尤以NK细胞和γδT细胞的冻存效果为佳。
高效：细胞复苏率高，多种细胞的复苏活率在90%以上；
方便：即用型，无需额外配制；
简捷：可适用于免疫细胞及干细胞的冻存及-196℃液氮长期保存，更多类型细胞系的简化操作需验证后使用。
产品使用方法
1、细胞冻存前准备
1）要求冻存的细胞活率大于90%(外周血提出的白膜层可立即冻存)。
2）计算细胞密度，不同细胞冻存密度请参照附表。
2、细胞冻存过程
1）将要冻存的细胞悬液，进行细胞计数，计数后离心，400g，10min即可。
2）弃去上清，将4℃保存的细胞冻存液缓慢加入离心后的细胞沉淀中，根据密度调整细胞冻存液用量。
3）反复吹吸混匀后，分装于细胞冻存管中，每管500ul-1000uL。
4）将分装好的细胞冻存管置于程序降温盒中程序降温或程序降温仪降温，投入液氮中保存即可。
备注：细胞冻存管一定要保证完全密封，否则复苏过程中有可能会炸裂。
3、细胞复苏过程
1）提前开启水浴锅，温度调节到37℃。
2）将细胞冻存管从液氮中取出，迅速置于水浴锅中融化，尽量1min融化，时间越短，对细胞影响越小。
3）将融化后的含细胞的冷冻保存液迅速析出置于新鲜培养基中充分混匀，如细胞冷冻保存液为500uL，则加入到5mL完全培养基中，如细胞冷冻保存液为1mL，则加入10mL完全培养基中。
4）混匀后立即离心，400g，10min即可，离心结束后弃上清，加入预温的新鲜培养液。
5）将适量的新鲜培养基缓缓加入细胞沉淀中，轻柔混匀，将混匀好的细胞移至事先准备好的培养容器中。混匀后分瓶置于二氧化碳培养箱中培养（二氧化碳浓度根据培养基要求决定，通常为5%）。
附表：
注意事项：
1. 冻存过程中,在将冻存液加入到细胞之后,请尽量在冰袋附近操作,因为低温可以避免保护剂对细胞造成损伤。
2. 请保证细胞冻存管完全密封,避免在复苏过程中冻存管炸裂。
3. 本产品为无菌包装,无需过滤,请注意无菌取用。
4. 为了您的安全和健康, 操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
无血清细胞冻存液应用数据展示
1、冻存PBMC数量活率情况
冻存PBMC，复苏后检测细胞数/细胞活率，与市场占比靠前的三种无血清细胞冻存液对比图。
-
均能保持较为一致的复苏后细胞数。
-
细胞活率均能超过95%。
2、冻存PBMC单核细胞分选情况
对比4种冻存液冻存的PBMC复苏后进行单核细胞磁珠分选，比较分选收获的单核细胞纯度及活率。
结论：Hycells冻存液和4号冻存液分选后的细胞活率均超过90%；Hycells冻存液在冻存PBMC后的单核细胞分选后纯度明显优于其他冻存液。
3、分选单核细胞诱导巨噬细胞及吞噬情况
1）使用单核分选相对较好的4号冻存液与Hycells冻存液对比诱导巨噬细胞，镜下观察：
结论：诱导至第5天的镜下结果，Hycells冻存液冻存的细胞有明显的树突状分化，诱导成功率高于4号冻存液。
2）使用单核分选相对较好的4号冻存液与Hycells冻存液对比诱导巨噬细胞，检测巨噬相关Marker表达。
结论：Hycells冻存液在CD24/80/83/206等巨噬细胞marker表达情况显著优于4号冻存液。
部分流式原始数据：
3）使用1号、3号、4号竞品冻存液与2号Hycells冻存液对比诱导巨噬细胞，并检测吞噬情况。
结论：Hycells冻存液及3号冻存液在3个批次的巨噬细胞上均有明显的吞噬效果，且批次间相对稳定。
4、冻存PBMC复苏后GDT细胞扩增
1）挑选不同批次分别用4号和Hycell冻存液冻存的细胞，使用合佑生自有产品GDT扩增试剂盒（货号：GD990-1L）进行GDT扩增，观察镜下细胞增殖情况。
结论：从DAY3和DAY11镜下结果来看，两个批次细胞聚团生长情况,Hycells冻存液均显著好于4号冻存液。
扩增倍数
纯度数据
结论：扩增倍数来看，Hycells冻存液冻存的3批细胞均有不同程度的扩增，某同类进口产品冻存的3批细胞均无明显扩增。
扩增纯度数据来看，Hycells冻存液扩增的GDT细胞随着扩增天数增长，纯度稳定上升，3名Donor样本均能在14天时达到90%以上纯度。
结论：Hycells冻存液冻存GDT复苏后细胞杀伤情况下降不明显，Hycells冻存液杀伤情况均好于某同类进口冻存液。
5、 冻存扩增后NK/GDT细胞的活率及过夜后数据总结
1）2名Donor扩增后的NK和GDT细胞冻存后复苏，培养过夜24h检测细胞活率。
GDT细胞
NK细胞
结论：使用2号Hycells冻存液冻存的扩增后NK/GDT细胞复苏后培养24h活率下降不明显;
使用4号同类进口冻存液冻存扩增后NK/GDT细胞复苏过夜后活率下降更为明显。
欲知合佑生生物更多无血清细胞冻存液详情可咨询商务负责人，扫描下方二维码可直接申请试用装。
联系人：谢先生 15201775322 。
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