国内首发|CAR阳性率检测新工具，一抗轻松破阳检
发布时间：
2023-04-03 13:11
引言：
还在为CAR-T研究中体外和体内检测CAR阳性率时，数据偏差很大，阴性对照也出现非特异性染色等问题烦恼不堪吗？还在眼花缭乱于不同CAR结构、直标和间标抗体、抗原蛋白中，因为各种检测蛋白价格昂贵又望而却步吗？
还在因患者体内检测CAR-T/NK时，由于复杂的血清环境、抗原脱落、抗原封闭等，出现假阳或假阴结果，不明确CAR细胞是否扩增，帮助临床做出正确判断和应对，给实验进程造成了误导而自责吗？
今天给您带来一款CAR阳性率检测新工具。上海合佑生生物科技有限公司于国内首发，重磅推出Anti-(G4S)n (B02H1) mAb这款CAR阳性率检测试剂，颠覆传统检测工具，轻松助您一抗破阳检。
Part 01
细胞疗法开发无限可能
作为近年来癌症治疗领域的重大突破之一，CAR-T细胞疗法在多个癌症治疗领域闪耀光芒。除了在CAR-T上的开发在蓬勃发展外，关于CAR-T的讨论开始转向更加充满想象空间的“CAR-X”新型细胞疗法，包括CAR-巨噬细胞（CAR-M）疗法、CAR-自然杀伤（NK）疗法、CAR-Treg细胞疗法、CAR γδ-T细胞疗法等。
Part 02
现有检测方法
CAR是旨在调节免疫细胞应答并将其重定向至自身起源性肿瘤抗原的工程化受体。该受体是一种可分解为四个主要组分的嵌合蛋白：胞外靶抗原结合结构域（例如，单链可变片段或scFv）、间隔区或铰链结构域、跨膜结构域和至少一个胞内信号转导结构域。这些元件的成功组合使CAR-免疫细胞重新定向以辨识选定的抗原并杀伤肿瘤细胞。
在发现和临床前研究期间设计CAR-X细胞时，科学家需要通过监测CAR表面表达部分，验证细胞有功能。大多数现有检测方法依赖结合于CAR细胞外结构域并利用scFv或铰链区可变重结构域或可变轻结构域内部特定序列的试剂。根据所用CAR-X检测试剂的类别，可提供的解决方案往往缺乏特异性，不易整合到流式检测组合中，或者仅用于检测单一CAR。
目前CAR检测手段利弊分析
目前，常用Protein L、靶抗原、Tag标签抗体、ADA（抗抗体）、共表达GFP /tEGFR等去检测CAR表达情况，然而这些方法各有利弊，有些在实际检测中并不适用。
Protein L：因其价格低、具有普适性，是目前常用的检测CAR的试剂，深受初学者喜爱。但是值得注意的是，尽管Protein L有很宽的结合范围，却不是一个通用的抗体结合蛋白。Protein L专一结合含有κ轻链的抗体，仅结合人κI,III,IV（不结合 VκII 亚型和λ轻链抗体）和小鼠的κI 轻链亚型，对其他亚型不适用，且对各亚型的亲和力各有高低。因此，CAR所用的抗体的亚型不同，会导致阳性率偏差。
靶抗原蛋白：也是选择较多的检测CAR的方式。它可以直接与CAR的ScFv或抗原配体结合，可直接判断CAR细胞结合抗原能力。但每个靶点的CAR需要不同的检测抗原，对多次跨膜蛋白和较难表达的蛋白不友好。抗原的活性和使用浓度直接决定检测的准确性，建议对比多品牌、多浓度摸索最佳检测条件。值得注意的是，患者体内CAR细胞检测，由于胞啃作用和游离的抗原对CAR-scFv的封闭作用，使得抗原蛋白非常不适用于体内CAR细胞检测。
融合表达：往往很多初学者和科研工作者会在CAR结构中，融合表达标签蛋白（如His/Flag/c-myc）和共表达检测蛋白（如GFP/tEGFR/CD34），以方便检测。值得注意的是，表达额外的蛋白可能会影响CAR分子的折叠和表达，2A linker和双启动子间接表达的分子往往也不能判断CAR分子的实际表达情况，导致CAR阳性率偏差。
抗药抗体ADA：通过筛选特异性识别scFv的抗独特型抗体（ADA），可以识别检测CAR阳性率，在体内和体外检测中优势明显，是较为理想的CAR检测工具。但难以获得，每种scFv都需要进行针对性筛选，普及性差。目前商业化的仅有anti-FMC63抗体。
| 检测 方法 |
举例 | 优点 | 缺点 |
| Protein L | Protein L | 价格低，普适性 | 某些亚型抗体不适应，检出率偏低 |
| 靶抗原 | 如CD19/BCMA蛋白 | 直接判断结合能力 | 抗原脱落/封闭，出现假阴性 |
| 标签抗体 | 如His/Flag/c-myc | 直接判断CAR表达 | 影响CAR折叠 |
| 共表达 | 如GFP/tEGFR/CD34 | 价格低，简单便捷 | 间接判定CAR |
| ADA | 如anti-FMC63 | 高效稳定 | 难以获得 |
| 本品 | Anti-GS linker (B02H1) | 价格低、普适性、高效稳定。 | CAR设计需含(G4S)n, n≥2 |
Part 03
通用CAR检测试剂国内首发
Anti-(G4S)n (B02H1) mAb这款识别广泛CAR的检测试剂可直接识别和确认您的CAR存在，而不管其抗原特异性。
Anti-(G4S)n (B02H1) mAb 产品技术背景
聚甘氨酸-丝氨酸(G4S)接头是一种灵活的非结构化合成肽接头序列，通常用于连接单链可变片段(scFv)的可变重(VH)域和可变轻(VL)域以及利用识别靶抗原的胞外域scFv的嵌合抗原受体(CAR)。接头本身由核心五肽序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser组成，该序列在基于scFv的CAR和scFv片段中重复并通常以15聚体(G4S)3或20聚体(G4S)4的形式存在。接头序列的长度在控制scFv稳定性和VH和VL结构域之间的非共价结合方面发挥作用。
Anti-(G4S)n (B02H1) mAb 抗体通过识别(G4S)n柔性Linker，可与细胞表面表达的不同特异性 CAR 发生反应，这些 CAR 在细胞外结构域的 scFv 中包含一个 (G4S)n接头(n≥2)。
Anti-(G4S)n (B02H1) mAb 识别G4S接头序列
Anti-(G4S)n (B02H1) mAb 产品特征：
应用场景：所有靶点
应用场景：所有类型CAR
不同浓度Anti-GSlinker(B02H1) 检测CAR阳性率
Anti-GSlinker(B02H1)检测CAR阳性率
比较不同抗体的检测效率
综上，Anti-GSlinker(B02H1)具有如下特征：
1、通用性：是一款经验证的通用 CAR 阳性率检测试剂，它可以通过消除不必要且耗时的步骤，加快药物研发进程。
2、普适性：适用于所有靶点CAR检测 (含(G4S)n, n≥2)；不同抗体类型CAR检测 (含(G4S)n, n≥2)
3、免干扰：无惧抗原干扰，检测CAR比例更准确。
4、高灵敏度：极高或者极低浓度下都表现出极佳的检测效率。
Anti-(G4S)n (B02H1) mAb 抗体是经过测试认证过的一款产品，现可提供四种形式，裸抗和荧光标记抗体（FITC /PE/ APC），国内现货（1-2周内），售前售后方便，欢迎广大客户垂询。
| 货号 | 产品名 | 规格 |
| GS-ARNC25 | Anti-(G4S)n (B02H1)mAb | 125 μL |
| GS-ARNC100 | Anti-(G4S)n (B02H1)mAb | 500 μL |
| GS-ARFT25 | Anti-(G4S)n (B02H1)mAb(FITC) | 125 μL |
| GS-ARFT100 | Anti-(G4S)n (B02H1)mAb(FITC) | 500 μL |
| GS-ARPE25 | Anti-(G4S)n (B02H1)mAb(PE) | 125 μL |
| GS-ARPE100 | Anti-(G4S)n (B02H1)mAb(PE) | 500 μL |
| GS-ARAP25 | Anti-(G4S)n (B02H1)mAb(APC) | 125 μL |
| GS-ARAP100 | Anti-(G4S)n (B02H1)mAb(APC) | 500 μL |
产品使用信息
【应用】流式细胞术（活）
【保存】在10mM HEPES钠(pH7.5)、150 mM NaCl、100 μg/mL BSA、50%甘油和低于0.02%的叠氮化钠中供应。2-8°C保存。切勿分装抗体。
【来源/同种型】兔 IgG1
【特异性/灵敏度】Anti-(G4S)n Rabbit mAb 可识别含有（G4S）n接头（n≥2）的基于scFv的CAR的外源表达水平。
【物种反应性】预期的所有物种
【来源/纯化】使用含有2~5个混合 Gly4Ser 重复序列的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
Part 04
产品试用装申请
上海合佑生生物科技有限公司团队深耕细胞治疗与基因治疗多年，持续更新迭代优化自己，于国内首次推出这款独具特色和竞争优势的产品Anti-GSlinker(B02H1)。团队将继续秉承创新、开放、包容的企业文化和态度，基于临床需求、行业痛点，不断推陈出新，给客户提供真正有价值差异化的产品和服务。希望在大家共同的加持下夯实各条产品管线和服务，未来进一步赋能领域合作伙伴，共同推动细胞治疗领域发展。
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REFERENCES
1. Wu CW. et al. Biochemistry. 1976 Jun 29;15 (13): 2863-8.
2. Stoiber S. et al. Cells. 2019 May 17;8(5):472.
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在hPL原料选择上，合佑生始终秉持“源头决定安全”的信念。制备所用的样本严格遵循相关采集标准，全部进行严苛供体筛查，从源头阻断疾病传播风险。更重要的是，从供者知情同意书、伦理批件，到GCP框架下的临床级采集，合佑生建立了一条完整可追溯的文件链，每一份样本均有据可查。相比行业长期依赖“血站过期血源”的传统模式，这是一种结构性的代际升级。
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