γδT细胞培养一站式完整解决方案


 

γδT细胞生物学特征概述

 

γδT细胞免疫治疗技术作为新兴的免疫疗法,以其独特的抗肿瘤优势成为新热点。γδT细胞主要通过分泌促凋亡分子和炎性细胞因子或通过TCR依赖性途径介导抗肿瘤治疗。多项临床研究数据表明,γδT细胞免疫治疗具有良好的耐受性和有效性。

 

γδT细胞主要通过产生促凋亡因子和细胞因子或通过TCR依赖性等途径来调节抗肿瘤反应。在γδT细胞抗肿瘤治疗中,面临的主要障碍是γδT细胞在体外扩增数量少且没有成熟扩增方法。目前,最有效扩增γδT细胞的方法是利用磷酸化抗原或抗γδTCR抗体。单纯的唑来膦酸扩增体系扩增倍数少,动物和人体内的持续扩增能力弱。

 

γδT细胞抗肿瘤的主要机制表现为:1、通过NK细胞受体直接杀伤肿瘤细胞。2、通过凋亡相关因子配体(TRAIL/FASL)诱导肿瘤细胞的凋亡。3、通过分泌的Granzyme/Perforin杀伤肿瘤细胞。4、通过ADCC效应杀伤肿瘤细胞。5、作为抗原递呈细胞,激活αβT细胞。6、促进DC细胞的成熟。7、促进B细胞产生抗体,提高体液免疫反应。8、通过表达的4-1BBL,激活NK细胞。

 

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图片来源于网络,如侵权请联系删除

 

γδT细胞的安全性和非MHC限制性,以及大量实验证明在癌症治疗过程中可以提供良好的预后和治疗价值。γδT细胞通过感应癌细胞特异性表达的应激信号,不靶向健康细胞,几乎无副作用,临床治疗拥有更广阔的应用前景。运用临床成熟的,高效的,安全性高的体外扩增方法获得标准型的γδT细胞已经成为治疗恶性肿瘤的必经之路,进一步构建有效的、安全性高的γδT细胞体外扩增体系则是亟待解决的问题。

 

上海合佑生生物是一家专注于原代免疫细胞及干细胞研究的高新技术企业。公司构建了一体化技术平台,致力于为客户提供覆盖免疫细胞与间充质干细胞一站式完整解决方案。公司提供γδT细胞培养全流程的专业支持:从合规且符合伦理标准的γδT超级供者预筛与采集服务,到结合高性能HiXpan® γδT无血清培养试剂盒与Cell Feeder底透细胞培养瓶的一站式培养体系,全面赋能细胞治疗的创新与临床转化。

 

γδT超级供者预筛

Part 1

 

01

Step 1 

收到血样,分离PBMC并冻存

02

Step 2

筛选冻存PBMC中γδT细胞比例(检测Maker:Vδ2+)挑选比例较高的批次(5%左右)。

03

Step 3

使用合佑生自产HiXpan® γδT无血清培养试剂盒进行γδT扩增

04

Step 4 

扩增到第14天统计扩增倍数、细胞纯度

 

  • 检测初始PBMC中CD3+/Vδ+的比例

  • Day 7,Day 10,Day 13分别检测扩增后细胞中CD3+/Vδ2+比例(检测Marker:Vδ2+,视细胞扩增情况可能会有时间上的微调)

  • Day 7后每隔2-3天进行细胞计数,统计扩增倍数。

  • Day 14收集目的细胞,冻存处理。

  • Day 14检测扩增倍数,细胞纯度。

 

扩增数据

 

Vδ2比例筛选

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HiXpan® γδT无血清培养试剂盒

Part 2

 

HiXpan® γδT无血清培养试剂盒产品优势:

  • 以新鲜/冻存PBMC为起始细胞,定向扩增Vδ2细胞,扩增200-300倍,工艺可以线性放大

  • 扩增纯度超过90%,杀伤活性高,高表达CD56、NKG2D、HLA-DR

  • 体内有持续扩增能力

 

显微镜下观察γδT细胞生长情况

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扩增曲线                                 纯度数据

 

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扩增倍数=细胞总数/初始PBMC数量

 

新鲜PBMC来源扩增γδT杀伤数据

  • PBMC来源扩增后γδT细胞在效靶比10:1,5:1,1:1,1:2时均能取得较好杀伤。

 

同Donor PBMC来源扩增γδT新鲜冻存杀伤数据对比

 

  • γδT细胞冻存(使用HiXpan® 无血清细胞冻存液冻存,货号:HYS01013)复苏后比新鲜杀伤没有明显降低,依然能取得明显杀伤效果。

 

 γδT细胞一站式培养验证数据

Part 3

 

细胞状态镜下观察图

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流式检测结果(Day14)

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Cell Feeder 底透细胞培养瓶培养γδT细胞测试结果

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综上,使用合佑生Cell Feeder 底透细胞培养瓶培养γδT:

  • 扩增效率更高:相比传统培养袋,7天的γδT细胞总扩增倍数提升了1.1-1.78倍,收获更多高活性细胞,显著降低单位细胞培养成本。

  • 同等条件下Cell Feeder底透细胞培养瓶较低密度接种扩增效果更好。

 

欲知合佑生生物更多γδT细胞一站式完整解决方案详情可咨询商务负责人,也可扫描下方二维码申请HiXpan® γδT无血清培养试剂盒或Cell Feeder底透细胞培养瓶。联系人:谢先生 15201775322 。

 

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参考文献

[1]刘  义,王  慧,马春玲.γδT细胞的生物学特征及在抗肿瘤免疫治疗中的研究进展[J].世界肿瘤研究, 2021, 11(3):8.DOI:10.12677/WJCR.2021.113011.

 

 

 

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